科技成果發布

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江西省科學院可轉化專利（二）

來源：原創更新時間：2024-08-16 瀏覽：406

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一種嗜酸乳桿菌高密度液體培養方法

專利號：ZL201610407425.3

發明人：袁林,郭建軍,曾靜,郭浩,王林庚

專利摘要：本發明公開了一種嗜酸乳桿菌高密度液體培養方法，包括以下步驟：將嗜酸乳桿菌經過三角瓶培養基以及種子罐培養基擴繁后進入發酵罐，發酵18h，培養溫度為35℃，攪拌轉速200rpm，pH采用2mol/L的NaOH通過種子罐補堿泵自動控制在7.3，并且通入氮氣與氫氣的混合氣體(氮氣體積/氫氣體積＝10：1)維持發酵罐壓力0.05MPa，期間每隔30min取樣一次并檢查葡萄糖殘余濃度，通過發酵罐上的補料泵補充葡萄糖維持發酵罐內葡萄糖濃度2g/L。本發明方法通過控制葡萄糖濃度來協調菌體生長，并且合適的pH值與還原性氣體氫氣的濃度，有效的提高了嗜酸乳桿菌的培養濃度。

一種優化角蛋白酶Ker高效分泌表達的信號肽及其應用

專利號：ZL201710341230.8

發明人：曾靜,袁林,郭建軍,郭浩,王林庚

專利摘要：本發明公開了一種優化角蛋白酶高效分泌表達的信號肽及其應用，屬于基因工程和酶工程領域。本發明通過對來源于枯草芽孢桿菌的46種分泌信號肽進行初步篩選，然后對其中6種明顯提高角蛋白酶分泌量的分泌信號肽進行定向改造，從而獲得一種優化角蛋白酶高效分泌表達的信號肽。此信號肽的N端具有信號肽AbnA的前九個氨基酸殘基，H段具有信號肽YfkN的疏水序列，C端具有信號肽PhoB的后四個氨基酸殘基。本發明通過在角蛋白酶Ker的N端融合此信號肽，使重組枯草芽孢桿菌的角蛋白酶分泌效率顯著提高，其胞外角蛋白酶酶活提高了3.39倍。改造后的菌株的胞外產角蛋白酶能力顯著提高，更利于工業化應用，可降低生產成本，提高生產效率。

糞腸球菌高密度發酵培養基及其發酵工藝

專利號：ZL201710401514.1

發明人：袁林,郭建軍,曾靜,楊罡,郭浩,王林庚

專利摘要：本發明涉及一種糞腸球菌的高密度發酵培養基及其發酵工藝，發酵培養基組分及其含量如下：甘油20～30g/L、豆粕10～15g/L、硫酸銨1～3g/L、三水合磷酸氫二鉀2～3g/L、三水合乙酸鈉3～8g/L、二水合檸檬酸鈉2～4g/L、七水合硫酸鎂0.3～0.8g/L、一水合硫酸錳0.1～0.3g/L。發酵工藝:采用高溶氧(25％)并結合甘油為碳源發酵,以碳酸鈉恒定發酵液pH值5.5，并在發酵過程中流加補料控制甘油濃度在10g/L,培養16小時后OD(600nm)大于35標志發酵結束，發酵液含糞腸球菌活菌數可達8×1010CFU/mL以上。本發明采用高溶氧結合甘油為碳源的發酵方式降低了發酵液中的乳酸濃度，發酵液含糞腸球菌可以達到8×1010CFU/mL以上，減小生物量的分離費用，縮短生產周期，降低生產成本、提高生產效率。

一種乳酸菌與雙歧桿菌的凍干保護劑及乳酸菌與雙歧桿菌凍干粉的制備工藝

專利號：ZL201810641334.5

發明人：袁林,郭建軍,曾靜

專利摘要：本發明提供一種乳酸菌與雙歧桿菌的凍干保護劑，提高乳酸菌與雙歧桿菌凍干過程的成活率，還提供一種乳酸菌與雙歧桿菌凍干粉的制備工藝，提高乳酸菌和雙歧桿菌凍干后產品在常溫下的穩定性。本發明制備的乳酸菌和雙歧桿菌凍干產品在凍干過程中的存活率明顯高于普通制備工藝，尤其在常溫下具有極高的活性穩定性，所以該項技術的應用可以避免乳酸菌或雙歧桿菌等微生態產品冷鏈運輸、低溫存儲，減少能耗；同時凍干過程的存活率高，可以提升企業的生產效率和降低生產成本。

一種熱穩定性提高的植酸酶突變體及其制備方法和應用

專利號：ZL202310242536.3

發明人：曾靜,何礎闊,袁林,郭建軍,王通,聶俊輝

專利摘要：本發明公開了一種熱穩定性提高的植酸酶突變體及其制備方法和應用，屬于基因工程和酶工程領域。所述植酸酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。編碼所述植酸酶突變體的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本發明采用USERecDNA重組技術將植酸酶YiAPPA中結構片段Val23～Thr67替換為植酸酶rPhyXT52中結構片段Val21～Thr65、以及將植酸酶YiAPPA中結構片段Leu381～Ile424替換為植酸酶rPhyXT52中結構片段Leu379～Asp423，獲得了熱穩定性顯著提高并且植酸酶活性基本不變的植酸酶突變體Yr?Mut，在動物飼料添加劑領域具有良好的應用前景。

一種熱穩定性和蛋白酶抗性提高的植酸酶突變體及其制備方法和應用

專利號：ZL202111458828.8

發明人：郭建軍,曾靜,袁林,黃國昌,熊大維,王振希,聶俊輝

專利摘要：本發明公開了一種熱穩定性和蛋白酶抗性提高的植酸酶突變體及其制備方法和應用，屬于基因工程和酶工程領域。本發明將植酸酶YiAPPA中第108位丙氨酸和第322位絲氨酸均突變為半胱氨酸，向植酸酶YiAPPA中引入二硫鍵C108?C322，獲得突變體YiAPPA?A108C/S322C。本發明提供的植酸酶突變體YiAPPA?A108C/S322C于85℃的半衰期由對照(突變前)的6min提高至15min，提高了1.5倍，并且YiAPPA?A108C/S322C的胃蛋白酶抗性和胰蛋白酶抗性分別提高了16％和12％。植酸酶突變體YiAPPA?A108C/S322C的熱穩定性和蛋白酶抗性明顯改良，在動物飼料添加劑領域具有良好的應用前景。

一種不依賴于抗生素并穩定高產α-淀粉酶的短小芽孢桿菌及其構建方法和應用

專利號：ZL202310337281.9

發明人：曾靜,袁林,郭建軍,何礎闊

專利摘要：本發明公開了一種不依賴于抗生素并穩定高產α?淀粉酶的短小芽孢桿菌及其構建方法和應用，屬于基因工程和發酵工程領域。所述短小芽孢桿菌(Brevibacillus choshinensis)的保藏編號為CCTCC NO：M 2023265。本發明通過敲除短小芽孢桿菌基因組中的必需基因ftsz，同時在表達重組α?淀粉酶的質粒中插入ftsz，獲得重組的短小芽孢桿菌菌株。本發明的短小芽孢桿菌菌株發酵過程中不依賴于額外的抗生素，具有極高遺傳穩定性，且發酵產酶水平由改造前的6241.3U/mL提高至23603.2U/mL，提高了3.8倍。因此，本發明有助于酶制劑的高效低成本生產，具有很好的工業應用前景。

一種乳酸菌發酵穩定劑及其制備方法和應用方法

專利號：ZL202211140427.2

發明人：郭建軍,袁林,曾靜,聶俊輝,黃國昌,熊大維,王通,岳斯源

專利摘要：本發明公開了一種乳酸菌發酵穩定劑及其制備方法和應用方法，所述乳酸菌發酵穩定劑包括糖類，D?氨基酸及磷酸氫鈣和抗壞血酸鈉，所述乳酸菌發酵穩定劑為乳酸菌的發酵培養提供營養成分能被有效利用，提高了在乳酸菌培養后發酵液中活菌數；采用所述乳酸菌發酵穩定劑進行培養后的乳酸菌菌體在形態上變得又短又卵圓，使菌體表面積減??；改性了乳酸菌菌體細胞壁形狀和強度，維持了其細胞膜和細胞壁的完整性；減少在冷凍過程中形成的冰晶對菌體的損傷，提高了乳酸菌的冷凍干燥的抗逆性，提高了乳酸菌在常溫下的存活率；本發明提供的乳酸菌發酵穩定劑，配方組成簡單、成本低廉，應用操作簡便，能使乳酸菌的性質更穩定、生物活性更強、常溫貯藏更久。

一種負壓條件下高密度發酵生產丁酸梭菌的工藝及應用

專利號：ZL202110231477.0

發明人：郭建軍,袁林,曾靜,聶俊輝,王通

專利摘要：本發明涉一種負壓條件下的高密度發酵生產丁酸梭菌的工藝，其包括將丁酸梭菌種子液接種至發酵培養基中，溫度35～40℃，攪拌轉速100～300r/min，用可溶性堿恒定pH至6.0～7.5，于負壓抽氣保持真空度為0.03～0.08Mpa下進行厭氧發酵，培養10h后發酵結束。采用負壓抽氣維持真空與開啟攪拌，營造了嚴格厭氧環境，以及基于丁酸梭菌菌體與芽孢的氨基酸特性優化了發酵培養基與補料分批發酵工藝，最大限度的降低了代謝有害物的累積，促進了丁酸梭菌的增殖與芽孢轉化，得到丁酸梭菌發酵液中芽孢數達到了79億CFU/mL以上。該工藝發酵生產丁酸梭菌具有不需通惰性氣體、發酵周期短、后處理簡單、總體上極大的降低了生產成本等優點，大幅度提高丁酸梭菌清液發酵的芽孢數，同時可生產出高性價比的丁酸梭菌。

一種淀粉降解能力提高的嗜熱酸性III型普魯蘭水解酶突變體及其制備方法和應用

專利號：ZL202210355246.5

發明人：曾靜,何礎闊,袁林,郭建軍,侯安偉,聶俊輝

專利摘要：本發明公開了一種淀粉降解能力提高的嗜熱酸性III型普魯蘭水解酶突變體及其制備方法和應用，屬于基因工程和酶工程領域。對嗜熱酸性III型普魯蘭水解酶TK?PUL中進化偶聯氨基酸殘基對K526/L538進行飽和突變，構建相應的飽和突變體文庫，通過比較各突變體對可溶性淀粉的酶活力，篩選出針對可溶性淀粉的比酶活力顯著提高的III型普魯蘭水解酶突變體Mut(K526N/L538E)。本發明提供的III型普魯蘭水解酶突變體Mut對可溶性淀粉的酶活力由對照(突變前)的54.08U/mg提高到190.47U/mg，提高了2.52倍，更適用于淀粉酶法制糖工業，有利于簡化工藝、節約能源。

一種制備玉米抗性淀粉的III型普魯蘭水解酶突變體及其制備方法和應用

專利號：ZL202310056259.7